ERA技术由苏州先达基因研发团队研发，具有全球自主知识产权。它利用抗体制药领域先进的MolecularDesign、DirectedEvolution、AffinityMaturation等技术手段，将来源于细菌，病毒和噬菌体的特定工具酶进行改造突变并筛选其功能，通过组合优化获得一种全新的核酸恒温快速扩增反应体系。在恒定温度条件下，仅需7-10分钟即可完成对靶DNA片段进行数亿倍的特异性扩增，其低温适应性和灵敏度等方面相比同类技术产品有了新的突破，达到全球行业领先水平，目前该技术方法具有全球自主知识产权，专利号：ZL.3；国际专利公开号（授权）：WOA1。

ERA与RPA技术皆源于上世纪70、80年代，YASUOIMAE、Sinha、Formosa等科学家们的科研成果，他们发现并利用重组酶、DNA聚合酶以及单链结合蛋白，成功进行了体外核酸扩增。ERA技术从原理上与RPA技术非常类似，所不同的是使用的酶来源于不同的物种，并进行了工程化改造，会让反应变得更快。

LAMP技术的扩增原理是基于DNA在65℃左右，利用4种不同的特异性引物识别靶基因的6个特定区域，在链置换型DNA聚合酶的作用下，与模板DNA互补序列配对，启动链置换DNA扩增。

与LAMP技术相比而言，ERA技术在以下方面有比较明显的优势：

1）需要的引物数量少，设计更简单。

2）扩增产物可直接用于克隆测序，方便判断。

3）平衡兼顾了灵敏度和特异性，极大地降低了假阳性的产生。

特点（温度、速度、灵敏度、特异性、稳定性）

1.ERA扩增试剂盒应在怎样的温度下使用？

标准的ERA扩增试剂盒的反应体系可在37℃-45℃的温度范围内进行高效扩增。低于37℃，不利于混合酶体系发挥最佳扩增效率；超过45℃，酶会加速失去活性，从而对反应体系产生不利影响，可能无法达到扩增程序的检出水平。

目前升级后的ERA科研产品（包括ERA、RT-ERA扩增试剂盒）默认推荐反应温度为40℃。关于反应条件优化，对于DNA为模板的扩增反应，反应温度可设置为37~45℃；对于RNA为模板的扩增反应，反应温度可设置为40~45℃。

2.当向扩增试剂中加入事先配制好的预混液时，扩增试剂变浑浊，是否正常？

扩增体系配制瞬间的浊化现象，是ERA试剂反应体系的正常现象。这是由于参与反应的酶类型多、浓度高，ERA反应体系在形成时常常会出现肉眼可见的乳状液。

3.提高反应温度，反应速度会不会加快？

取决于引物探针和多个酶的动力学参数。温度太高有时会失去相互作用导致效率下降，甚至导致反应体系中部分酶活力下降，使探针失去保护导致假阳性发生。一般43℃以上效率就差很多。

4.ERA扩增反应的产物可以保存吗？

基础型扩增试剂盒的扩增产物均可以在4℃环境下短期保存。如需长期保存，建议置于-20℃。

荧光型扩增试剂盒的结果一般由仪器实时记录，保存过程中核酸酶等会消化扩增产物，导致再次检测的结果不准；如保存后用其他检测手段，会增加气溶胶污染风险。试纸型扩增试剂盒的扩增产物也不建议保存，可能会带来假阳性风险。

5.收到试剂盒发现泡沫箱中冰袋融化，箱内温度接近室温，试剂盒还能使用吗？

可以，我们的产品37℃稳定性测试可以达到7天，活力无明显降低。所以，室温下3天以内放心使用。对于长期储存，我们建议储存在-20℃。

开封后未用完的试剂，最好不要在4℃储存时间过久（一般不超过3天），因为4℃水分子还是有一部分以气态运动，会使冻干试剂吸潮，导致其中酶活力下降。最佳储存环境为密封、干燥、-20℃环境下。

6.可以对ERA扩增产物进行终点分析吗？

可以，但不包括荧光型试剂盒。因为在反应结束后，未经迅速失活处理，核酸酶会逐渐消化扩增产物。要分析扩增产物，请使用基础型（RT）或试纸型试剂盒进行跑胶检测分析。

7.为什么实验出现假阳性的结果，可能的原因有哪些？

如果在无模板对照中观察到假阳性结果，可能的原因主要由污染，或引物设计引起。

1）通常由污染引起的假阳性比较多见，现象为无模板对照或阴性对照的检测结果显示与阳性结果非常类似。以荧光检测为例，具有扩增曲线，荧光值较高且一般与阳性值相差不大。对此，我们建议区分试剂配制区和扩增分析区。在使用任何扩增后打开反应管的终点检测方法时，必须采用严格的污染控制措施，且在开盖前务必对反应产物降温以平衡内外气压差，降低气溶胶污染风险。

要排除或清除污染，我们建议用消毒液或75%的酒精对工作区域进行彻底消毒，有条件的对工作区域进行持续通风，并使用新的扩增试剂（溶解剂、激活剂等）。一般重复几次清洁消杀后可彻底清除污染。

2）引物设计问题导致，现象为无模板对照或阴性对照的检测结果显示与阳性结果有较大的差异。以新冠核酸检测试剂盒检测为例，一般假阳性的出峰时间较晚（在13分钟以后），荧光Δ值较低且扩增曲线不明显。针对此类问题，我们建议应重新设计和筛选引物、探针。

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